【关键词】泰山土大黄；总蒽醌；含量测定

【摘要】 目的 测定泰山土大黄的总蒽醌含量。方法 应用紫外分光光度法分别测定两种提取方法的泰山土大黄总蒽醌的含量。结果 两种提取方法的总蒽醌含量分别为0.328%和0.607%。结论 方法2更为准确可靠。

　　五岳独尊的泰山不仅是世界自然文化双遗产，而且蕴藏着丰富的中药资源。泰山产土大黄是泰山分布广泛且有重要开发应用前景的中药之一。由于泰山独特的地理条件，因而所产中药材多具有明显的地域特征。因此对于泰山地产药材的系统研究及与其他产区相同药材的比对研究是进一步研究开发的基础。
　　土大黄又名吐血草、箭头草、救命王、金不换、红筋大黄、化血莲等，多用蓼科酸模属植物钝叶酸模(Rumex obtusifoliusl)和红丝酸模(Rumexchalepensis mill)的根和根茎^[1]，泰山产土大黄是蓼科酸模属植物钝叶酸模的根和根茎。有研究表明^[2，3]土大黄具有止血、祛痰止咳平喘、抗菌抗病毒、抗肿瘤等广泛的药理作用，主要药效成分为总蒽醌类。本文应用了两种蒽醌类成分的提取方法提取了泰山土大黄的总蒽醌，并应用紫外分光光度法分别测定了其含量。
　　
　　1 实验材料
　　
　　土大黄(采于泰山)，大黄素(对照品，中国药品生物制品鉴定所，批号110756-200110)；醋酸镁、甲醇、三氯甲烷、无水乙醇、无水硫酸钠等试剂均为分析纯；所用仪器有紫外可见分光光度计Spectrumlab54(上海棱光技术有限公司)，旋转蒸发器RE-52A(上海亚荣生化仪器厂)，电子分析天平AR2140［澳豪斯(上海)有限公司］。
　　
　　2 方法与结果
　　
　　2.1 显色剂的配制 称取适量醋酸镁，用甲醇配制成0.6%的醋酸镁-甲醇溶液作为显色剂。
　　2.2 检测波长的选择 精密称取大黄素适量，用0.6%醋酸镁-甲醇溶液配成对照品溶液，测定在200~700 nm之间的紫外可见光谱，由测定结果可得在510 nm处有最大吸收，此波长被选为检测波长。
　　2.3 标准曲线的建立 精密称取大黄素对照品10 mg用甲醇定容为50 ml的标准容液。精密吸取标准液80、160、320、400、600、800、1000 μl于10 ml具塞试管中，用0.6%醋酸镁-甲醇溶液定容，充分摇匀后于510 nm处测定吸收度。以0.6%醋酸镁-甲醇液作空白对照。测定结果见表1。 

　　2.4 蒽醌类成分提取方法及含量测定
　　2.4.1 方法1^[4] 取土大黄药材适量，粉碎后过60目筛。精密称取粉末7.5 g(水分不高于9.0%)置索氏提取器中，加入乙醇适量，置沸水浴中加热回流提取至黄色变浅至近无，提取液置水浴浓缩至约5 ml,放冷。加入稀盐酸25 ml，氯仿150 ml，置水浴(80℃左右)加热水解30 min，放冷，分出氯仿层。水液用氯仿萃取2次(100 ml 75 ml)合并3次氯仿液，挥干氯仿。残渣用甲醇洗涤并转入50 ml容量瓶中，稀释至刻度摇匀后即为样品溶液。离心后，取上清液1 ml于10 ml容量瓶中，甲醇定容，后取1 ml于10 ml容量瓶中，用0.6%醋酸镁-甲醇定容后即可进行测定。测定结果见表1。
　　2.4.2 方法2^[5，6] 精密称取土大黄粉末0.051 6 g于烧瓶中，同时加30 ml氯仿和15 ml 2.5 mol/L硫酸，沸水浴回流水解2 h。后过滤取氯仿层，称取适量无水Na₂SO₄加入氯仿中脱水后，回收氯仿。残渣加甲醇溶解并定容为10 ml。精密吸取1 ml于10 ml容量瓶中，加0.6%醋酸镁-甲醇溶液并定容。摇匀后于510 nm处测定吸光度并将结果代入回归方程，可计算总蒽醌含量。所得结果见表2。 

　　通过表2，可知方法2提取含量较高，方法1测定含量较低，可能在提取中将其有效成分破坏，也可因放置时间较长导致结果降低。究竟方法2合适与否，为了进一步确证，可用方法2进行加样回收率实验验证测定结果的优劣。
　　2.5 加样回收率实验 取已提取尽蒽醌类成分药材粉末80 mg，精密加入大黄素粉末5 mg，加入氯仿30 ml，沸水浴回流提取2 h，过滤，除去药渣。回收氯仿后，加甲醇溶解并定容为25 ml。精密吸取1 ml于10 ml容量瓶中，用0.6%醋酸镁-甲醇溶液定容，摇匀后于510 nm处测定吸收度，测定值代入回归方程，计算含量，结果见表3。
　　2.6 显色稳定性试验 取高、低2个浓度的标准品液，按标准曲线制备方法，加0.6%醋酸镁-甲醇液显色，在室内灯光下，每隔一定时间于510 nm处测定吸光度，测定结果见表4。 

　　3 讨论
　　
　　不同产地对土大黄总蒽醌含量有一定影响，泰山产土大黄总蒽醌含量略低于贵州所产^[7]，另外生长年限、采收时间也会影响其含量，产地及生长环境的影响机制尚有待于进一步研究。本实验研究中考察了两种不同提取方法对总蒽醌含量的影响，可以看出，由于所用试剂及处理方法不同，测定结果差异较大。经过加样回收率实验、显色稳定性试验等的考察，说明方法2更为准确可靠，可以作为总蒽醌含量测定的常规方法。
　　
　　参 考 文 献
　　［1］ 宋立人，洪恂，丁绪亮，等.现代中药学大辞典.人民卫生出版社，2001.
　　［2］ 傅正良.牛广斌.王丽芳.论大黄、山大黄及土大黄的临床应用.光明中医，2008，23(9)：1354-1355.
　　［3］ 王桂荣.大黄、山大黄、土大黄的基源、成分、药理与临床应用概述.邯郸医学高等专科学校学报，2003，16(1)：89-91.
　　［4］ 王锦红 洪宇农.土大黄含量测定方法研究.中国药业，2004，13(2)：335-336.
　　［5］ 魏玉辉，武新安，陈岚.大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究.兰州大学学报，2005，31(1)：13-15.
　　［6］ 刘翠哲，王汝兴，刘喜纲.测定大黄总蒽醌含量的分光光度法改进.天津中医药，2004，21(4)：335-336.
　　［7］ 王世清，麻秀萍，万明香，等.贵州土大黄的品种鉴定与含量测定.中药材，2004，27(10)：725-727.